Набор предназначен для высокоэффективного приготовления секвенирующих библиотек из готовых ампликонов длиной до 600 п.н., предназначенных для работы на платформах Illumina. Ключевым преимуществом методики является исключение этапа фрагментации, поскольку исходным материалом служат уже готовые ПЦР-продукты (ампликоны) целевых геномных локусов. Это не только значительно ускоряет процесс пробоподготовки, но и позволяет избежать нежелательной деградации ДНК и потери материала, обеспечивая высокий выход целевых последовательностей. Процедура оптимизирована для работы с входным количеством ДНК в диапазоне от 10 до 100 нг, что охватывает большинство стандартных задач в области таргетного секвенирования, включая панели генов и поиск точечных мутаций.
Особенности набора SG GM Ampli
- Исключена стадия очистки между процессами репарации и последующего лигирования, что сокращает продолжительность подготовки проб, а также снижает риск возникновения ошибок и перекрестной контаминации;
- индексы вносятся в библиотеку при помощи ПЦР, индексные праймеры совместимы с праймерами по технологии Illumina TrueSeq;
- оптимальное число циклов ПЦР — 6.
Состав набора SG GM Ampli
- 3 в 1 буфер;
- 3-фермент;
- лигазный буфер;
- лигаза;
- адаптеры;
- ПЦР буфер;
- ПЦР фермент 1;
- ПЦР фермент.
Обратите внимание, что следующие компоненты, необходимые для завершения подготовки библиотек, в комплект не входят и приобретаются отдельно.
Реагенты для очистки: парамагнитные частицы на основе технологии SPRI (например, Smart beads, Raissol, арт. #smartb 50/120/240) для селективного осаждения и отмывки фрагментов ДНК на различных стадиях протокола.
Праймеры для индексирования: комплекты уникальных праймеров (#Plate1_SG_GM и #Plate2_SG_GM), необходимые для введения индексов и последующего объединения (мультиплексирования) образцов в одном потоке секвенирования на платформах Illumina.
Условия хранения: для всех компонентов набора SG GM Ampli требуется соблюдать температурный режим хранения -20 °C, срок годности — 12 мес.
