Диаэм представляет новую модель проточного цитометра Guava 12, в котором усовершенствовано ПО и оптимизировано техническое обслуживание.
Проточный цитометр Guava 12 включает в себя:
- Высокомощные (100 – 150 мВт) лазеры (488, 532 и 642 нм) для работы с мелкими объектами, менее 200 нм.
- Обновленное ПО для большего контроля над автоматическим сбором данных.
- Gain Independent Compensation – автоматическое изменение компенсации при регулировке гейтов.
- Максимально количество лазеров/каналов флюоресценции – 3 / 14.
Цитометры Guava (Рисунок 1.) – простые и надёжные в использовании приборы, которые выполняют широкий спектр задач. Guava easyCyte – настольные проточные цитометры, которые занимают мало места в лаборатории, при необходимости помещаются в ламинарный бокс (шкаф) биологической безопасности и обладают рядом существенных преимуществ. Стоимость цитометра Guava значительно ниже аналогичных проточных цитометров. Цитометры Guava требуют меньше обслуживания и технической поддержки, чем остальные проточные цитометры. У проточных цитометров Guava нет отходов обжимающей жидкости, так как она не используется для фокусировки частиц через капиллярную проточную ячейку (Рисунок 2).
Рисунок 1. Серия проточных цитометров Guava.
|
Рисунок 2. Капиллярная проточная ячейка.
|
Примеры использования проточных цитомтров Guava
1. Проточный цитометр Guava – применение в ветеринарии.
Иммунофенотипирование лейкоцитов заключается в детекции поверхностных маркеров дифференциации или CD (cluster of differentiation antigens) антигенов. В данном исследовании иммунофенотипирование Т- и В-лимфоцитов из крови и лимфатических узлов от нормальных собак и собак с лимфопролиферативным заболеванием проводилось с использованием двух моноклональных антител (против CD3 и CD21) с использованием проточного цитометра Guava.
|
|
Рисунок 3. Иммунофенотипирование клеток. Графики дот-плот показывают распределение клеток по параметрам FSC-НLin прямого и SSC-HLin бокового светорассеяния, взятых из нормальной крови и лимфатических узлов при лимфоме. А) Клетки здоровой периферической крови с установленным порогом threshold по прямому светорассеянию - FSC. Лимфоциты внутри гейта (красный цвет) и популяция гранулоцитов (зеленый цвет). Порог threshold был установлен для события с низкими параметрами прямого и бокового светорассеяния. Б) Иммунофенотипирование здоровых клеток периферической крови: 78% клеток которые были гейтированы положительные на CD3+ и 12.6% на CD21+. Остальное - неокрашенные клетки. В) B-клетки из лимфатических узлов 98.5% (В) внутри гейта положительные на CD21+ (Г).
|
2. Проточный цитометр Guava – применение в клинико-лабораторной диагностике
- Подсчёт общее количество CD4+ Т лимфоцитов у пациентов больных ВИЧ проточным цитометром Guava.
- Анализ цельной крови из пальца после криоконсервации с помощью проточного цитометра Guava. (Рисунок 4).
- Мониторинг множественной миеломы с помощью проточной цитометрии (Рисунок 5).
|
|
|
Рисунок 4. Распределение клеток свежей крови и после криоконсервации на графике дот-плот по прямому и боковому светорассеиванию. Распределение внутри гейта гранулоцитов (красный цвет) и лимфоцитов (зеленый цвет) в образце.
|
Рисунок 5. Экспрессия антигенов CD138 и CD38 на плазматических клетках (ПК) при множественной миеломе. Лимфоциты (Лф) представлены на диаграммах в качестве внутреннего контроля для маркеров CD19 и CD56: а – миеломные ПК с иммунофенотипом CD138+/CD38+/CD45–/CD1–/ CD56+; б – миеломные ПК с отсутствием CD38, иммунофенотип: CD138+/CD38–/CD45–/CD19–/CD56+; в – ПК при ММ с «омоложенным» иммунофенотипом CD138–/CD38+/CD45±/CD19–/CD56+
|
3. Проточный цитометр Guava – применение в микробиологии.
Проточный цитометр Guava широко используется для определения жизнеспособности эукариотических клеток, основан на использовании флуоресцентных красителей, таких как SYTO, SYBR, PI, SYTOX. Флуоресцентные красители SYTO, SYBR, PI, SYTOX, EvaGreen – это ДНК связывающие красители использующиеся в Real-time PCR. На рисунке 4 показан пример использования проточного цитометра Guava и флуоресцентного красителя EvaGreen для определения жизнеспособности клеток Listeria monocytogenes АТСС 13932 (Рисунок 6).
|
|
Рисунок 6. Анализ данных куриной DNA, Escherichia coli RNA, и L. monocytogenes АТСС 13932, по протоколу: В 20 мкл L. monocytogenes АТСС 13932 добавлено 5 мкл EvaGreen, 365 мкл деионизированная води и 10 мкл диметилсульфоксида (Диметилсульфоксид (ДМСО)). После этого образец инкубировалcя в темноте 15 минут, после чего анализ данных проводили на проточном цитометре Guava.
|
Литература
1. Rapid, effective and user-friendly immunophenotyping of canine lymphoma using a personal flow cytometer
Stratos Papakonstantinou,
Inese Berzina
Amanda Lawlor,
Emma J O’Neill and
Peter J O’Brien
Ir Vet J. 2013; 66(1): 6. Published online 2013 Apr 1. doi:
10.1186/2046-0481-66-6
2. Evaluation of a single-platform microcapillary flow cytometer for enumeration of absolute CD4+ T-lymphocyte counts in HIV-1 infected Thai patients
Kovit Pattanapanyasat ,
Yuwadee Phuang-Ngern,
Surada Lerdwana,
Punneeporn Wasinrapee,
Natthaga Sakulploy,
Egarit Noulsri,
Charin Thepthai,
Janet M McNicholl Cytometry B Clin Cytom. 2007 Sep;72(5):387-96. doi: 10.1002/cyto.b.20167.
3. A field method for cryopreservation of whole blood from a finger prick for later analysis with flow cytometry
Aaron D Blackwell,
Angela R Garcia,
Ryan L Keivanfar,
Sarah Bay Am J Phys Anthropol. 2021 Apr;174(4):670-685. doi: 10.1002/ajpa.24251. Epub 2021 Feb 17.
4. Роль и место проточной цитометрии в диагностике и мониторинге минимальной остаточной болезни при множественной миеломе И.В. Гальцева, Ю.О. Давыдова, Н.М. Капранов, У.Л. Джулакян, Л.П. Менделеева ФГБУ «Гематологический научный центр» Минздрава России; Россия, 125167 Москва, Новый Зыковский проезд, 4а Контакты: Гальцева Ирина Владимировна
irinagaltseva@gmail.com
5. Application of EvaGreen for the assessment of Listeria monocytogenes АТСС 13932 cell viability using flow cytometry
Elena Kotenkova,
Dagmara Bataeva,
Mikhail Minaev,
Elena Zaiko AIMS Microbiol. 2019 Jan 25;5(1):39-47. doi: 10.3934/microbiol.2019.1.39. eCollection 2019.
Проточный цитометр Guava
