Разделяй и изучай! Диссоциаторы клеток DSC и наборы ферментов для выделения единичных клеток из тканей

Проводя доклинические испытания или эксперименты на модельных животных, как мыши, крысы, лягушки, ученые активно используют гистологические методы, для изучения морфологии тканей, или визуализации in vivo, для изучения процессов в органах.

Но что делать, когда изучить нужно не ткань или орган целиком, а отдельные клетки или изучить популяции клеток на уровне single cell mRNA-Seq? Как перейти с уровня изучения функций органов на уровень изучения процессов, протекающих в отдельных клетках?

Именно об этом и будет данный пост.

Не секрет, что клетки в составе ткани находятся в связанном состоянии, поэтому очень непросто их выковырять оттуда и еще сложнее сохранить их жизнеспособность. Особенно важно сохранить максимальную жизнеспособность, если требуется найти клетки из минорных популяций, слабо представленных в данном органе.

Классический метод получения суспензии первичных культур подразумевает механическое измельчение органа на мелкие кусочки, удаление лишних тканей и последующее воздействие протеолитическими ферментами (например, коллагеназами) на межклеточный матрикс.

Чаще всего, для разрушения межклеточного матрикса применяются различные типы коллагеназ, которые специфически расщепляют коллаген — основной структурный белок соединительной ткани. В зависимости от состава коллагенов, представленных в матриксе той или иной ткани, рекомендовано использование того или иного вида коллагеназ или их комбинации.

Полученную суспензию процеживают через сито, отмывают от ферментов и используют по назначению (культивируют или изучают).

Протокол ручного выделения клеток из тканей

Основные проблемы ручного метода:

• низкая эффективность и низкий выход живых клеток: эффективность метода будет зависеть от того, как мелко измельчили орган, температуры среды и концентрации фермента. При этом при малейшем отклонении, клетки под воздействием ферментов очень быстро гибнут;
• большие затраты ручного труда и риск влияния человеческого фактора: каждый этап требует участия оператора; малейшая ошибка может существенно снизить выход живых клеток;
• низкая воспроизводимость метода и сложность стандартизации: от раза к разу выход живых клеток будет существенно варьировать, поскольку на результат будет влиять множество факторов: от того как мелко порезали ткань, до активности ферментов.

Техническое решение: диссоциаторы клеток DSC.

Диссоциаторы клеток — это современные инструменты, которые позволяют решить все перечисленные проблемы. Они обеспечивают:

• высокий выход живых клеток,
• стандартизацию процесса,
• минимальное влияние человеческого фактора.

Компания RWD представляет диссоциаторы серии DSC, которые позволяют стандартизовать процедуру получения первичных клеточных линий из органов и добиться максимального выхода живых клеток.

Использование протеолитических ферментов, в сочетании с механическим воздействием и при постоянной оптимальной температуре тают высокий выход клеток.

Диссоциаторы клеток RWD

Серия клеточных диссоциаторов DSC представлена моделями, рассчитанными на одновременную обработку 2, 4 и 8 образцов.

Меню приборов позволяет установить на каждый образец свой индивидуальный протокол, для одновременной обработки нескольких типов тканей параллельно.

Диссоциатор клеточный на 2 образца, DSC-200, RWD Life Science, Китай

Диссоциатор клеточный на 4 образца, DSC-410, RWD Life Science, Китай

Диссоциатор клеточный на 8 образцов, DSC-810, RWD Life Science, Китай

Сравнение клеточных диссоциаторов DCS

Наборы ферментов RWD — это оптимизированная комбинация протеолитических ферментов,для работы с конкретным типом ткани. Состав и концентрация ферментов подобрана таким образом, чтобы обеспечить максимально щадящий режим лизиса межклеточного матрикса и минимальное воздействие на сами клетки.

Под каждый набор ферментов в памяти диссоциаторов DSC созданы адаптированные и отработанными протоколы. Но при желании, пользователь может модифицировать имеющийся протокол или создать собственный.

Совместное использование наборов ферментов RWD и диссоциаторов DSC позволяет получить высокий выход клеток с максимальной выживаемостью даже из таких сложных образцов, как жировая ткань, мышцы, кожа, кишечник и мозг.

К каждому набору прилагается подробная пошаговая инструкция и протокол для диссоциатора DSC, что позволяет использовать прибор даже студентам!

См. также:

Ниже вы можете задать вопрос или оставить запрос в свободной форме: