Пропидия йодид (PI) образовывать крепкие связи с ДНК, давая излучение в красном диапазоне при встраивании в двухцепочечную ДНК. Эта особенность используется для окраски ДНК клеток. Краситель не способен проходить сквозь оболочки живых клеток, не имеющие повреждений, но попадает внутрь через разрушенные мембраны омертвевших клеток, а также клеток в позднем апоптозе. С учетом этой характеристики, пропидий йодид применим вместе с флуоресцентными зондами (Calcein-AM, FDA) для окраски омертвевших клеток и наблюдения за ними.

Раствор для окрашивания на основе пропидия йодида представляет собой готовый к использованию флуоресцентный раствор с концентрацией 100 мкг /мл. Применим для разметки ядер мертвых клеток. Одного флакона хватает примерно на 500 окрашиваний.

Красный флюоресцентный краситель, окрашивает ядро и хромосомы, так как не проникает в живые клетки, используется для окрашивания мёртвых клеток в популяции. Применяется для флюоресцентной и конфокальной лазерной микроскопии, проточной цитометрии и флюорометрии.

Длина волны возбуждения флуоресценции, нм — 535.
Длина волны испускания флуоресценции, нм — 617.

Красный флюоресцентный краситель, окрашивает ядро и хромосомы, так как не проникает в живые клетки, используется для окрашивания мёртвых клеток в популяции. Применяется для флюоресцентной и конфокальной лазерной микроскопии, проточной цитометрии и флюорометрии.

Длина волны возбуждения флуоресценции, нм — 535.
Длина волны испускания флуоресценции, нм — 617.

Красный флюоресцентный краситель, окрашивает ядро и хромосомы, так как не проникает в живые клетки, используется для окрашивания мёртвых клеток в популяции. Применяется для флюоресцентной и конфокальной лазерной микроскопии, проточной цитометрии и флюорометрии.

Длина волны возбуждения флуоресценции, нм — 535.
Длина волны испускания флуоресценции, нм — 617.

Набор для определения апоптотических клеток содержит все необходимые реагенты для мечения апоптотических и некротических клеток с помощью аннексина V, конъюгированного с AF488, и йодистого пропидия.

AF488 — сульфированный родамин, яркий, фотостабильный и гидрофильный флуорофор. Краситель излучает в зеленом (FITC) канале.

• Максимум поглощения, нм — 495;
• максимум эмиссии, нм — 519.

Йодистый пропидий (PI) — непроницаемый через плазматическую мембрану ДНК-краситель, позволяющий различать популяции некротических, апоптотических и здоровых клеток на основе целостности мембраны. После связывания с ДНК краситель излучает в оранжево-красном канале.

• Максимум поглощения, нм — 535;
• максимум эмиссии, нм — 617.

Состав набора для определения апоптотических клеток с помощью аннексина V-AF488

• Аннексин V, AF488 конъюгат, мкг – 5;
• Propidium Iodide solution, 0,1 мг/мл, мкл – 100;
• Annexin V Binding Buffer, 5x, мл – 15.

Условия транспортировки и хранения

• Транспортировка – до трех недель при комнатной температуре;
• хранение, °С – -20°С;
• срок хранения – 12 месяцев.

Рекомендуемые концентрации аннексина V-AF488 — от 2 до 5 мкг/мл, в зависимости от исследуемой клеточной культуры. Перед экспериментом необходимо опробовать разные разведения аннексина V-AF488 для определения оптимальной концентрации.

Окрашивание с помощью йодистого пропидия — опционально. Этот этап можно пропустить, если в задачах нет необходимости исследовать некроз.

Важно! Аннексин V можно использовать в качестве маркера апоптоза только в клетках с интактной плазматической мембраной. При нарушении целостности плазматической мембраны аннексин V может связываться с ФС внутри клетки и давать ложноположительный результат.

Применение набора для определения апоптотических клеток с помощью аннексина V-AF488

Приготовление растворов

1. Растворите содержимое пробирки с лиофилизированным аннексином V-AF488 в 250 мкл деионизованной воды.

Важно! Разведенный рекомбинантный белок необходимо хранить защищенным от света при температуре 2-8°C. В растворе конъюгат стабилен в течение месяца. При длительных экспериментах рекомендуется приготовить аликвоты и хранить их при температуре −20°С. Избегать повторного замораживания!

2. Приготовьте необходимый объём 1х буфера для связывания, смешав 1 часть 5х буфера для связывания с 4 частями деионизованной воды.

Окрашивание клеток

1. Адгезированные клетки аккуратно снимите с поверхности роста подходящим способом. С суспензионными клетками начинайте работу со следующего пункта.2. Промойте клетки один раз охлаждённым PBS (рН7.4) и один раз 1х буфером для связывания.

3. Ресуспензируйте клетки в холодном 1х буфере для связывания.

4. Отберите 100 мкл суспензии клеток (от 1×105 до 1×106 клеток/мл) в микроцентрифужные пробирки объемом 1.5 мл. Для проточной цитометрии необходимо заготовить дополнительные пробирки с соответствующими контролями (см. описание контролей ниже).

5. Добавьте 2-5 мкл раствора аннексина V-AF488 в каждую пробирку, инкубируйте в течение 10-15 мин при комнатной температуре в защищенном от света месте.

6. Без предварительной отмывки добавьте 400 мкл 1x буфера для связывания в каждую пробирку.

7. (Опционально) Добавьте 5 мкл йодистого пропидия в каждую пробирку с клетками. Аккуратно перемешайте содержимое пробирки и инкубируйте в течение 5 мин при комнатной температуре в защищенном от света месте.

Важно! Не промывайте клетки от йодистого пропидия. Йодистый пропидий должен оставаться в буфере во время сбора данных.

8. Окрашенные клетки храните при температуре 2-8°C в защищенном от света месте до проведения анализа.

Важно! Количественное определение клеток методом проточной цитометрии или флуоресцентной микроскопии необходимо производить в течение 4 ч от начала окрашивания из-за негативного воздействия йодидистого пропидия на жизнеспособность клеток.

Проточная цитометрия

1. Для цитофлуориметрического анализа апоптоза и некроза клеток с помощью аннексина V-AF488 и йодистого пропидия помимо целевого окрашивания необходимо приготовить контроли: неокрашенные клетки (отрицательный контроль для настройки прибора); клетки, окрашенные только аннексином V-AF488, и клетки, окрашенные только йодистым пропидием (для настройки компенсации).

2. Анализ связывания аннексина V-AF488 проводят с использованием детектора сигнала FITC.

3. Анализ клеток, окрашенных йодистым пропидием, осуществляют с помощью детектора сигнала фикоэритрина.

Флуоресцентная микроскопия

1. Отберите каплю суспензии с окрашенными клетками и поместите ее на предметное стекло. Накройте клетки покровным стеклом.

2. В качестве альтернативы, адгезированные клетки можно окрашивать непосредственно на покровном стекле. После окрашивания переверните покровное стекло на предметное, так, чтобы клетки находились между предметным и покровным стёклами.

3. (Опционально) Клетки после окрашивания аннексином V, перед визуализацией можно промыть 1х буфером для связывания и зафиксировать в 2% параформальдегиде. Не фиксируйте клетки перед инкубацией с аннексином V-AF488, поскольку любое нарушение клеточной мембраны может вызвать неспецифическое связывание аннексина V с ФС на внутренней поверхности клеточной мембраны.

4. Исследование клеток под флуоресцентным микроскопом осуществляют, используя двойной набор фильтров для FITC и родамина.

Результат окрашивания

• Ранние апоптотические клетки, связавшие аннексин V-AF488, окрашиваются в зеленый цвет в плазматической мембране.
• Некротические клетки в результате проникновения йодистого пропидия внутрь клетки будут окрашены красным.
• Апоптотические клетки с нарушенной в результате вторичного некроза целостностью мембраны будут иметь красное окрашивание (йодистый пропидий) и ореол зеленого окрашивания (AF488) на клеточной поверхности (плазматическая мембрана).
• Здоровые клетки будут лишены окрашивания.

Аннексин V обладает высоким сродством к фосфатидилсерину и признан одним из чувствительных индикаторов для выявления раннего клеточного апоптоза.

Набор также содержит популярный флуоресцентный краситель пропидий йодид (PI), который не проникает в живые клетки, и обычно используется для обнаружения мертвых клеток в популяции.

Подходит для проточной цитометрии и флуоресцентного микроскопа.

Хранить при 4-8 °C до 12 месяцев, аннексин V-FITC хранить при -20 °C без длительного использования.

Счетчик клеток LUNA-STEM оснащен двумя каналами флуоресценции и оптикой светлого поля, позволяющей отличать живые и мертвые клетки с ядром от клеток без ядра. Счетчик LUNA-STEM совместим со стволовыми клетки и клетками стромально-васкулярной фракции жировой ткани (SVF) и дает представление об общей концентрации клеток, концентрации ядерных и неядерных клеток, жизнеспособности клеток и их размере.

Характеристики счетчика клеток Luna-STEM

• Диапазон измерений размера клеток, мкм — 1–90;
• рекомендованный диапазон измерений размера клеток, мкм — 5–60;
• диапазон концентрации, клеток/мл — 1×10⁴ –1×10⁷;
• минимальный объем образца, мкл — 10;
• время обработки, сек — 30-60;
• встроенное ПО;
• интерфейс USB;
• внутренняя память;
• камера, МП — 5;
• ручная фокусировка;
• сенсорный экран;
• анализ флуоресценции клеток;
• 2 канала флуоресценции;
• Ex: 470±20 нм (синий), Em: 525±25 нм (зеленый), 600 LP (красный);
• оптика светлого поля;
• счет по красителям Йодиду пропидия, Акридиновому оранжевому;
• габариты, Ш×Г×В, см — 22×21×9;
• вес, кг — 1,8.

Комплект поставки: счетчик клеток, слайд для флюоресценции, USB накопитель, краситель Йодид пропидия / Акридиновый оранжевый, калибровочные частицы.

Аксессуары и опции: принтер, бумага для принтера, многоразовый слайд, слайд для анализа флуоресценции, краситель Йодид пропидия / Акридиновый оранжевый, калибровочные частицы, валидация IQ/OQ.

Счетчик клеток Luna-FX7 позволяет быстро и эффективно проводить подсчет клеток, определять их жизнеспособность, размер, определять эффективность флуоресценции клеток. Совместим с клеточными линиями, первичными клеточными культурами, клетками из цельной крови, мононуклеалистическими клетками крови (PBMC), спленоцитами, тимоцитами, клетками дрожжей.

Характеристики счетчика клеток Luna-FX7

• Диапазон измерений размера клеток, мкм — 1–90;
• рекомендованный диапазон измерений размера клеток, мкм — 3–60;
• диапазон концентрации, клеток/мл — 1×10⁴ – 5×10⁷;
• минимальный объем образца, мкл — 10;
• варианты исполнения слайдов — 1, 2, 3, 8 камерные;
• время обработки, сек — в светлом поле для 12 изображений не более 10 с ручной фокусировкой, не более 20 — с автофокусом, при флюоресценции для 12 изображений не более 30 с ручной фокусировкой, не более 40 — с автофокусом;
• встроенное ПО для отслеживания биопроцессов;
  
• интерфейс USB, Wi-Fi, Internet;
• внутренняя память на 1 Тб;
• ручная фокусировка;
• автофокус;
• сенсорный экран;
• анализ флуоресценции клеток;
• 2 канала флуоресценции;
• счет в светлом поле;
• счет по красителям трипановому синему, Эритрозину В, Йодиду пропидия / Акридиновому оранжевому, Диацетат Флуоресцеину;
• флуоресценция в зеленом свете — Ex: 470±20 нм, Em: 530±25 нм;
• флуоресценция в красном свете — Ex: 530±20 нм, Em: 620±30 нм;
• габариты, Ш×Г×В, см — 24,5×28×24;
• вес, кг — 4,5.

Комплект поставки: счетчик клеток, одноразовый слайд, USB накопитель, краситель трипановый синий, краситель Йодид пропидия / Акридиновый оранжевый, калибровочные частицы.

Аксессуары и опции: опции: принтер, бумага для принтера, одноразовый слайд, слайд для для анализа флуоресценции, краситель трипановый синий, краситель Эритрозин B, краситель Йодид пропидия / Акридиновый оранжевый, валидация IQ/OQ, дополнительное ПО для соответствия требованиям FDA 21 CFR, часть 11.

Счетчик клеток Luna-FL позволяет быстро и эффективно проводить подсчет клеток в светлом поле, подсчет флуоресцентных клеток, подсчет клеток дрожжей и анализ трансфекции GFP. Совместим с клеточными линиями, первичными клеточными культурами, клетками крови, мононуклеалистическими клетками крови (PBMC), спленоцитами, тимоцитами, клетками дрожжей, клетками, экспрессирующими GFP.

Характеристики счетчика клеток Luna-FL

• Диапазон измерений размера клеток, мкм — 1–90;
• рекомендованный диапазон измерений размера клеток, мкм — 5–60;
• диапазон концентрации, клеток/мл — 1×10⁴–1×10⁷;
• минимальный объем образца, мкл — 10;
• время обработки, сек — в светлом поле не более 10, при флюоресценции не более 30;
• встроенное ПО;
• интерфейс USB;
• внутренняя память;
• камера, МП — 5;
• ручная фокусировка;
• сенсорный экран;
• анализ флуоресценции клеток;
• 2 канала флуоресценции;
• Ex: 470±20 нм (синий), Em: 525±25 нм (зеленый), 600 LP (красный);
• счет в светлом поле;
• счет по красителям трипановому синему, Эритрозину В, Йодиду пропидия / Акридиновому оранжевому, Диацетат Флуоресцеину;
• габариты, Ш×Г×В, см — 22×21×9;
• вес, кг — 1,8.

Комплект поставки: счетчик клеток, слайд для флюоресценции, USB накопитель, краситель трипановый синий, краситель Йодид пропидия / Акридиновый оранжевый, калибровочные частицы.

Аксессуары и опции: принтер, бумага для принтера, одноразовый слайд, многоразовый слайд, слайд для анализа флуоресценции, краситель трипановый синий, краситель Эритрозин B, краситель Йодид пропидия / Акридиновый оранжевый, валидация IQ/OQ.

Счетчик клеток Luna-FX7 позволяет быстро и эффективно проводить подсчет клеток, определять их жизнеспособность, размер, определять эффективность флуоресценции клеток. Совместим с клеточными линиями, первичными клеточными культурами, клетками из цельной крови, мононуклеалистическими клетками крови (PBMC), спленоцитами, тимоцитами, клетками дрожжей.

Характеристики счетчика клеток Luna-FX7

• Диапазон измерений размера клеток, мкм — 1–90;
• рекомендованный диапазон измерений размера клеток, мкм — 3–60;
• диапазон концентрации, клеток/мл — 1×10⁴ – 5×10⁷;
• минимальный объем образца, мкл — 10;
• варианты исполнения слайдов — 1, 2, 3, 8 камерные;
• время обработки, сек — в светлом поле для 12 изображений не более 10 с ручной фокусировкой, не более 20 — с автофокусом, при флюоресценции для 12 изображений не более 30 с ручной фокусировкой, не более 40 — с автофокусом;
• встроенное ПО;
• интерфейс USB, Wi-Fi, Internet;
• внутренняя память на 250 Гб;
• ручная фокусировка;
• автофокус;
• сенсорный экран;
• анализ флуоресценции клеток;
• 2 канала флуоресценции;
• счет в светлом поле;
• счет по красителям трипановому синему, Эритрозину В, Йодиду пропидия / Акридиновому оранжевому, Диацетат Флуоресцеину;
• флуоресценция в зеленом свете — Ex: 470±20 нм, Em: 530±25 нм;
• флуоресценция в красном свете — Ex: 530±20 нм, Em: 620±30 нм;
• габариты, Ш×Г×В, см — 24,5×28×24;
• вес, кг — 4,5.

Комплект поставки: счетчик клеток, одноразовый слайд, USB накопитель, краситель трипановый синий, краситель Йодид пропидия / Акридиновый оранжевый, калибровочные частицы.

Аксессуары и опции: опции: принтер, бумага для принтера, одноразовый слайд, слайд для для анализа флуоресценции, краситель трипановый синий, краситель Эритрозин B, краситель Йодид пропидия / Акридиновый оранжевый, валидация IQ/OQ, дополнительное ПО для соответствия требованиям FDA 21 CFR, часть 11.

Счетчик клеток LUNA-II YF позволяет быстро и эффективно проводить подсчет дрожжевых клеток, определять их жизнеспособность и размер. В отличие от проточных цитометров, счетчик LUNA-II YF обладает расширенными возможностями декластеризации, благодаря чему будут подсчитаны даже самые слипшиеся клетки.

Характеристики счетчика клеток LUNA-II YF

• Диапазон измерений размера клеток, мкм — 1–60;
• рекомендованный диапазон измерений размера клеток, мкм — 1–30;
• диапазон концентрации, клеток/мл — 5×10⁴ –1×10⁷;
• минимальный объем образца, мкл —10;
• время обработки, сек — не более 10 (ручная фокусировка), не более 15 (автофокус);
• встроенное ПО;
• интерфейс USB;
• внутренняя память на 1000 измерений;
• возможность установить до 300 пользовательских протоколов;
• камера, МП — 1,1;
• ручная фокусировка;
• автофокус;
• сенсорный экран;
• анализ флуоресценции клеток;
• 2 канала флуоресценции;
• счет по красителям Йодиду пропидия, Акридиновому оранжевому, Диацетат
• Флуоресцеину;
• габариты, Ш×Г×В, см — 16×18×28;
• вес, кг — 1,8.

Комплект поставки: счетчик клеток, слайд для анализа флуоресценции, USB накопитель, краситель Йодид пропидия / Акридиновый оранжевый, буфер.

Аксессуары и опции: принтер, бумага для принтера, многоразовый слайд, слайд для анализа флуоресценции, краситель Йодид пропидия / Акридиновый оранжевый, калибровочные частицы, буфер для разведения клеток, набор для определения жизнеспособности дрожжевых клеток, валидация IQ/OQ.

Набор состоит из двух самых популярных красителей содержит пропидия йодид (PI) и Кальцеин АМ.

Пропидия йодид способен проникать и интегрироваться в двойную спираль ДНК внутри клетки, светится красным цветом и используется для окрашивания мертвых клеток или находящихся на стадии позднего апоптоза, поскольку способен проходить только через нарушенные оболочки клеток.

Кальцеин АМ проникает в живые клетки, обладая низкой токсичностью для них, почти не нарушает функции и структурные особенности клеток и органелл. Применим для работы с большинством эукариотических клеток, не используется при работе с клетками бактерий и грибов, потому что их клеточные мембраны для красителя непроницаемы. Светится зеленым цветом, который обеспечивается за счет гидролиза ацетоксиметилового эфира при взаимодействии с эстеразами внутри клеток. Так как в погибших клетках эстераз нет, их свечение не происходит.

Кальцеин АМ (ацетоксиметиловый эфир кальцеина) содержит группу ацетилметоксиметилового эфира (АМ), которая увеличивает гидрофобность, что позволяет ему с легкостью проходить сквозь мембранную оболочку живых клеток. При попадании внутрь способен расщепляться до кальцеина эндогенными клеточными эстеразами. С потерей AM-группы краситель больше не способен легко проникать сквозь оболочку и, таким образом, удерживается внутри клетки; этот зонд способен источать яркий зеленый свет при связывании с ионами кальция, находящимися внутри клеток. При некоторых условиях проведения экспериментов может излучать синий свет.

Комплект красителей оптимизирован и улучшен производителем для выполнения двойной окраски с помощью Кальцеина AM живых клеток и PI-маркировки мертвых клеток, что позволяет анализировать уровни жизнеспособности и состояния как живых, так и мертвых клеток.

Счетчик микробных клеток QUANTOM Tx — это автоматический счетчик клеток на основе изображений, который может идентифицировать и подсчитывать отдельные бактериальные клетки за считанные минуты.

Счетчик QUANTOM Tx автоматически фокусирует, захватывает и анализирует несколько изображений окрашенных флуоресценцией клеток для обнаружения бактериальных клеток с высокой чувствительностью и точностью. Благодаря новому программному обеспечению для обнаружения и удаления клеток, счетчик QUANTOM Tx может точно идентифицировать отдельные бактериальные клетки даже в самых плотных популяциях.

Характеристики счетчика клеток QUANTOM Tx

• Диапазон измерений размера микробных клеток, мкм — 0,3–50;
• диапазон концентрации, клеток/мл — 1×10⁵ –1×10⁹;
• минимальный объем образца, мкл — 0,17 (для 20 изображений);
• время обработки, сек — не более 30 (для 10 изображений);
• встроенное ПО;
• интерфейс USB, Wi-Fi;
• внутренняя память на 128 Гб;
• объектив — 10×;
• ручная фокусировка;
• автофокус;
• сенсорный экран;
• подсчет флуоресцентно окрашенных микробных клеток;
• Ex 470/30 нм, Em 530/50 нм;
• габариты, Ш×Г×В, см — 43,3×31×22,5;
• вес, кг — 10,8.

Центрифуга QUANTOM имеет решающее значение для распределения клеток вдоль одной плоскости для точного подсчета с помощью счетчика QUANTOM Tx. Приобретается отдельно.

Комплект поставки: счетчик клеток, слайд для анализа флуоресценции, USB накопитель, краситель Йодид пропидия / Акридиновый оранжевый, буфер.

Аксессуары и опции: принтер, бумага для принтера, многоразовый слайд, слайд для анализа флуоресценции, краситель Йодид пропидия / Акридиновый оранжевый, калибровочные частицы, буфер для разведения клеток, набор для определения жизнеспособности дрожжевых клеток, валидация IQ/OQ.

Уникальная особенность Attune NxT — функция акустической фокусировки, позволяющей проводить измерения с высокой скоростью без потери качества, сохраняя низкую вариабельность.

Возможности Attune NXT при анализе плоидности

• Высокая скорость измерения с сохранением низких значений коэффициента вариации;
• возможность использовать готовые реагенты Thermo FS для окраски ядер или использовать реагенты сторонних производителей;
• отработанные протоколы для разных задач в анализе плоидности;
• классический анализ плоидности при помощи голубого лазера (488 нм) и йодистого пропидия;
• возможность установки дополнительных лазеров (можно докупать после покупки прибора);
• легкая замена фильтров при необходимости их оптимизации;
• возможность использовать опциональный автосэмплер и роботизированную подачу для автоматической смены образцов и ускорения производительности;
• универсальность — при необходимости прибор можно использовать и для других задач в области проточной цитометрии.

Технические характеристики Attune NXT

• Лазеры — 1 (488 нм, 50 мВт), возможен апгрейд на рабочем месте пользователя до 4х-лазерной конфигурации;
• профиль лазера: 10×50 мкм, с плоской вершиной;
• каналы детекции — FSC¹, SSC², 4 флуоресцентных (до 14 флуоресцентных параметров при покупке дополнительных лазеров);
• чувствительность MESF³ — ≤ 80 MESF for FITC, ≤ 30 MESF for PE;
• формат загрузки — пробирки размерами от 17 x 100 мм до 8,5 x 45 мм (включая стандартные пробирки на 1,5, 2 и 5 мл), опциональный автозагрузчик для 96- и 384-луночных планшетов;
• скорость потока — 12,5-1000 мкл/мин;
• скорость сбора данных — до 65 000 событий/сек;
• метод определения концентрации частиц — прямой подсчет;
• габариты, Ш × Г × В — 400 × 580 × 430 мм;
• вес — 29 кг.

Предложение включает проточный цитофлуориметр Attune NxT, оснащенный лазером 488 нм и 4 детекторами флуоресценции, 1 год гарантии. В комплект поставки входит дополнительный фильтр 603/48, оптимизированный под флуоресценцию йодистого пропидия, и стартовый набор реагентов для запуска.

¹ forward scatter, прямое светорассеивание;
² side scatter, боковое светорассеивание;
³ molecules of equivalent soluble fluorochrome, число молекул эквивалентного растворимого флуорохрома.

Примеры статей с использованием проточного цитофлуориметра Attune NxT

1) An Advanced Protocol for the Quantification of Marine Sediment Viruses via Flow Cytometry Mara Elena Heinrichs, Daniele De Corte, Bert Engelen and Donald Pan.
Разработка протоколов для подсчета вирусных частиц с помощью проточной цитометрии Attune NxT в морских донных отложениях. doi.org/10.3390/v13010102.

2) Control of Multigene Expression Stoichiometry in Mammalian Cells Using Synthetic PromotersYash D. Patel,Adam J. Brown, Jie Zhu, Guglielmo Rosignoli, Suzanne J. Gibson, Diane Hatton, David C. James.
Использование Attune NxT для контроля стехиометрии мультигенной экспрессии, с использованием синтетических промоторов в клетках млекопитающих. doi: 10.1021/acssynbio.0c00643.

3) Immunomodulatory Responses of Two Synthetic Peptides against Salmonella Typhimurium Infection. Marco Antonio Ibarra-Valencia, Gerardo Pável Espino-Solis, Blanca Elisa Estrada and Gerardo Corzo.
Иммуномодулирующий потенциал синтетических антимикробных пептидов оценивали путем определения профилей экспрессии цитокинов с помощью проточного цитометра Attune NxT. doi: 10.3390/molecules26185573.

4) ATP13A3 is a major component of the enigmatic mammalian polyamine transport system. Norin Nabil Hamouda, Chris Van den Haute, Roeland Vanhoutte, Ragna Sannerud, Mujahid Azfar, Rupert Mayer, Álvaro Cortés Calabuig, Johannes V Swinnen, Patrizia Agostinis, Veerle Baekelandt, Wim Annaert, Francis Impens, Steven H L Verhelst, Jan Eggermont, Shaun Martin, Peter Vangheluwe.
Attune NxT использовался для изучения новых компонентов системы транспорта полиаминов через мембрану у млекопитающих. doi: 10.1074/jbc.RA120.013908.

5) Microengineered perfusable 3D-bioprinted glioblastoma model for in vivo mimicry of tumor microenvironment. Lena Neufeld¹, Eilam Yeini¹, Noa Reisman¹, Yael Shtilerman¹, Dikla Ben-Shushan¹, Sabina Pozzi¹, Asaf Madi², Galia Tiram¹, Anat Eldar-Boock¹, Shiran Ferber¹, Rachel Grossman³, Zvi Ram³, Ronit Satchi-Fainaro¹ ⁴ *.

В лабораторных исследованиях многие лекарственный препараты показывают многообещающие результаты, но в конечном итоге не проходят клинические испытания. Современные модели рака неадекватны и это основная проблема. У большинства моделей отсутствует взаимодействие опухоль – строма, для правильного представления комплексной биологии рака. Гетерогенное микроокружение фибриновой глиобластомы, состоящей из клеток глиобластомы, астроцитов и микроглии, воспроизвели материалом полученным от пациентов. 3D-модель может стать основой для быстрого, воспроизводимого и надежного обнаружения цели, персонализированный скрининг, разработка лекарств, и потенциально заменить клеточные культуры и модели животных, в качестве мощной платформы.

Проточний цитофлуоримета Attune NxT использовался для оценки экспрессии Р-селектина в клетках, выращенных в 2D-культуре (2D culture) и в фибрине – 3D-бионик (fibrin 3D-bioink). С помощью проточного цитофлуориметра Attune NxT показан высокие уровни экспрессии P-селектина на клетках PD-GB4, выращенных в фибрине – 3D-бионик по сравнению с 2D культурой. doi: 10.1126/sciadv.abi9119.

Кальцеин АМ (ацетоксиметиловый эфир кальцеина) — нефлуоресцентный гидрофобный краситель, который способен проникать в клетку сквозь ее мембрану. Попадая внутрь клетки, гилролизуется эндогенными эстеразами, получается сильно отрицательно заряженная полярная молекула кальцеина, которая не может снова пройти через мембрану, и таким способом удерживается внутри клетки.

Кальцеин (максимальная длина волны возбуждения: 494 нм; максимальная длина волны излучения: 517 нм) способен светиться ярким зеленым светом. По сравнению с другими красителями, такими, как BCECF AM и CFDA AM, Кальцеин АМ считается одним из лучших флуоресцентных вариантов из-за низкого уровня цито-токсичности. Он также практически не оказывает влияния на клеточные функции и особенности, такие, как пролиферация, хемотаксис лимфоцитов и низкая чувствительность к рН.

Из-за отсутствия эстеразы в некротизированных клетках Кальцеин АМ используется только для тестирования показателей жизнеспособности и кратковременного мечения живых клеток. В сочетании с пропидия йодидом позволяет одновременно окрасить флуоресцентными красителями и живые, и мертвые клетки, что полезно для оценки общей или среднестатистической жизнеспособности.

Продукт предназначен только для научных исследований, его не следует использовать профессионалам для диагностических процедур или лечения, употреблять в пищу или принимать в качестве лекарства, а также его нежелательно хранить в обычных жилых помещениях. Применение красителя требует лабораторного халата и одноразовых перчаток.

Набор для анализа клеточного цикла в клетках (фиксация в этаноле, окраска йодистым пропидием). Набор оптимизирован для использования на клеточном анализаторе Muse, но совместим также с другими проточными цитометрами.

Набор для определения концентрации и жизнеспособности бактерий:

• для проточной цитометрии (лазер 488 нм);
• состав — SYTO 9, йодид пропидия (PI); калибровочные микросферы (6 мкм) для определения концентрации;
• принцип действия: SYTO 9 (зеленый) окрашивает все клетки, PI (оранжево-красный) окрашивает клетки с поврежденной мембраной.