ПЦР: наборы, миксы

Мастер-микс EpiArt HS Taq — это готовая к использованию 2-кратная смесь, предназначенная для амплификации ДНК после бисульфитной конверсии. По сравнению с обычной ДНК, бисульфитная конверсия приводит к серьезному повреждению ДНК и влияет на эффективность ПЦР. Мастер-микс EpiArt HS Taq содержит специально сконструированную ДНК-полимеразу HS Taq Hot-Start EpiArt и оптимизированную буферную систему для достижения эффективной амплификации, чувствительности и специфичности для ДНК, после бисульфитной конверсии, по сравнению с обычными реагентами для ПЦР. Полученный ПЦР-продукты содержат выступающие ТА-концы и могут быть непосредственно клонированы в Т-вектора.

Компоненты мастер-микса

Компонент	EM201-01	EM201-02	EM201-03
Мастер-микс для амплификации ДНК после бисульфитной конверсии EpiArt HS Taq (2х)	1 мл	5×1 мл	15×1 мл

Комплект поставки: мастер-микс для амплификации ДНК после бисульфитной конверсии EpiArt HS Taq (2х).

Условия хранения: -20 °С.

Представляет собой двойной мастер-микс для проведения количественной ПЦР с использованием метода химерной флуоресценции SYBR Green I. Основной компонент Taq ДНК-полимераза, ДНК-полимераза с горячим стартом, основанная на блокировании антител, которая может эффективно ингибировать неспецифическую амплификацию в условиях низкой температуры. В то же время она оснащена реакционным буфером, оптимизированным для количественной ПЦР, который подходит для высокой специфичности и высокой чувствительности.

В то же время этот продукт содержит специальный пассивный эталонный краситель ROX, который подходит для всех инструментов для количественной ПЦР, и нет необходимости регулировать концентрацию ROX на разных инструментах. Синий краситель добавляется в премикс, который выполняет функцию добавления образца и индикатора.

Характеристики мастер-микса

• Транспортировка – в мокром льду;
• срок годности – 12 месяцев;
• хранение – -20℃.

Совместимость с приборами:

• ABI: 5700, 7000, 7300, 7700, 7900, 7900HT, 7900 HT Fast, StepOne, StepOne Plus, 7500/7500 Fast, ViiA 7, серия QuantStudio, PikoReal Cycler;
• Bio-Rad: CFX96, CFX384, iCycler iQ, iQ5, MyiQ, MiniOpticon, Opticon, Opticon 2, Chromo4;
• Eppendorf: Realplex 2s, Mastercycler;
• IIIumina: Eco QPCR;
• Qiagen: серия Rotor-Gene;
• Roche: LightCycler.

Набор реактивов для ПЦР с Taq-ДНК-полимеразой Hot Start содержит рекомбинантную HS-Taq ДНК-полимеразу и растворы всех необходимых компонентов для проведения стандартной ПЦР c "горячим" стартом (за исключением матрицы ДНК и праймеров). В состав набора входят: раствор HS-Taq ДНК-полимеразы (5 ед. акт./мкл), 5× ПЦР буфер, 50 мМ MgCl₂, 50× смесь dNTP и 6× буфер для нанесения на гель. Все реагенты высокого качества и оптимизированы для проведения ПЦР.

HS-Taq ДНК-полимераза представляет собой рекомбинантную Taq ДНК-полимеразу, инактивированную специфическими моноклональными антителами. HS-Taq ДНК-полимераза неактивна при температуре до +70 °С. Это позволяет избежать образования неспецифических продуктов и праймер-димеров при низкой температуре на стадии смешивания компонентов ПЦР-смеси. Активация осуществляется на первом цикле ПЦР путём 5-минутной инкубации при +95 °С. Рекомбинантная Taq ДНК-полимераза обладает 5´-3´ ДНК-зависимой полимеразной активностью и 5´-3´ экзонуклеазной активностью нативной Taq ДНК-полимеразы из Thermus aquaticus. Скорость продвижения Taq ДНК-полимеразы зависит от сложности ДНК-матрицы и составляет примерно 1 т.п.н./мин. Рекомбинантная HS-Taq ДНК-полимераза идеально подходит для стандартной ПЦР с матрицы до 5 т.п.н. и обладает способностью присоединять адениновый остаток к 3’-концу синтезируемой цепи ДНК, поэтому ПЦР-фрагменты пригодны для ТА-клонирования.

5× ПЦР-буфер оптимизирован для проведения эффективной и воспроизводимой ПЦР (не содержит MgCl₂). В состав буфера входят добавки, повышающие время полужизни и процессивность HS-Taq ДНК-полимеразы за счет повышения её стабильности во время ПЦР. Буфер химически стабилен, инертен и не меняет оптимальной температуры отжига праймеров или характеристики плавления матрицы. Входящие в набор 50 мМ раствор MgCl₂ и 50× смесь dNTP позволяют легко оптимизировать реакционную смесь под конкретную систему «матрица-праймеры», а 6× Буфер для нанесения на гель облегчает пробоподготовку для электрофореза ПЦР-продуктов и контроль над ходом электрофореза.

Состав набора

Кат. #	HS-Taq ДНК-полимераза, 5 ед. акт./мкл*	5× ПЦР-буфер	50 мМ MgCl2	50× смесь dNTP (10 мМ каждого)	6× буфер для нанесения на гель	Кол-во, ед. акт.
1957.0500	1 × 100 мкл	2 × 1,5 мл	1 × 1 мл	2 × 200 мкл	1 × 1,75 мл	500
1957.2250	3 × 150 мкл	8 × 1,5 мл	2 × 1 мл	4 × 400 мкл	3 × 1.75 мл	2250

* За единицу активности принимали количество фермента, катализирующее включение 10 нмоль dNTP в кислотонерастворимый продукт за 30 мин при 74 °С.Условия реакции:50 мМ Трис-HCl, pH 9.0 (при 25 °С), 50 мМ NaCl, 10 мМ MgCl₂, 200 мM dATP, 200 мM dCTP, 200 мM dGTP, 50 мM [³H] dTTP, 0.25 мг/мл активированной ДНК из тимуса теленка.

Буфер для хранения HS-Taq ДНК-полимеразы:
50 мМ Трис-HCl, pH 8.0 (при 25 °С), 50 мМ NaCl, 0,1 мМ ЭДТА, 1мМ дитиотреитол, 50% (v/v) глицерин и 1% (v/v) Тритон Х-100.

5× ПЦР-буфер:
50 мM Трис-НCl, рН 8.5 (при 25 °С), 250 мM KCl, 0.5% (v/v) Tween 20, стабилизаторы Taq ДНК-полимеразы.

Область применения:

• ПЦР с “горячим” стартом.
• Высокопроизводительная ПЦР.
• Обычная ПЦР с высокой воспроизводимостью.
• Наработка ПЦР-продуктов для ТА-клонирования.
• Вторая стадия ОТ-ПЦР.

Ограничения к использованию:

• Не рекомендуется использовать для ампликонов длиной свыше 5 т.п.н.
  

Ингибирование и инактивация
Ингибиторы: ионные детергенты (дезоксихолат натрия, саркозил и додецилсульфат натрия (SDS) в концентрациях выше, чем 0,06, 0,02 и 0,01%, соответственно).
Инактивируется экстракцией смесью фенол/хлороформ.

Хранение и транспортировка: при -20°С; не более 50 циклов замораживания-размораживания.

Срок хранения: при соблюдении условий хранения и транспортировки 1 год.

Набор реактивов для ПЦР с Taq-полимеразой Hot Start (+MgCl₂) содержит рекомбинантную HS-Taq ДНК-полимеразу и растворы всех необходимых компонентов для проведения стандартной ПЦР c “горячим” стартом (за исключением матрицы ДНК и праймеров). ПЦР-буфер, входящий в состав набора, уже содержит MgCl₂ в концентрации 10 мМ, достаточной для постановки большинства рутинных ПЦР.

HS-Taq ДНК-полимераза представляет собой рекомбинантную Taq ДНК-полимеразу, инактивированную специфическими моноклональными антителами. HS-Taq ДНК-полимераза не активна при температуре до +70 °С. Это позволяет избежать образования неспецифических продуктов и праймер-димеров при низкой температуре на стадии смешивания компонентов ПЦР-смеси. Активация осуществляется на первом цикле ПЦР путём инкубации в течение 5 мин при +95 °С. Рекомбинантная Taq ДНК-полимераза обладает 5´-3´ ДНК-зависимой полимеразной активностью и 5’-3’ экзонуклеазной активностью нативной Taq ДНК-полимеразы из Thermus aquaticus. Скорость продвижения Taq ДНК-полимеразы зависит от сложности ДНК-матрицы и составляет примерно 1 т.п.н./мин. HS-Taq ДНК-полимераза идеально подходит для стандартной ПЦР с матрицы до 5 т.п.н.; она обладает способностью присоединять адениновый остаток к 3’-концу синтезируемой цепи, поэтому продукты ПЦР могут использоваться для ТА-клонирования.

5× ПЦР-буфер (+MgCl₂) оптимизирован для проведения эффективной и воспроизводимой ПЦР. В состав буфера входят MgCl₂ (10 мМ) и добавки, повышающие время полужизни и процессивность HS-Taq ДНК-полимеразы за счет повышения её стабильности во время ПЦР. Буфер химически стабилен, инертен и не меняет оптимальной температуры отжига праймеров или характеристики плавления матрицы. Входящие в набор 50 мМ раствор MgCl₂ и 50× смесь dNTP позволяют легко оптимизировать реакционную смесь под конкретную систему «матрица-праймеры», а 6× Буфер для нанесения на гель облегчает пробоподготовку для электрофореза ПЦР-продуктов и контроль над ходом электрофореза.

Состав набора

Кат. #	HS-Taq DNA-полимераза, 5 ед. акт./мкл*	5× ПЦР буфер (+MgCl2)	50 мМ MgCl2	50× смесь dNTP (10 мМ каждого)	6×буфер для нанесения на гель	Кол-во, ед. акт.
1958.0500	1 × 100 мкл	2 × 1.5 мл	1 × 1 мл	2 × 200 мкл	1 × 1.5 мл	500
1958.2250	3 × 150 мкл	8 × 1.5 мл	2 × 1 мл	4 × 400 мкл	3 × 1.5 мл	2250

* За единицу активности принимали количество фермента, катализирующее включение 10 нмоль dNTP в кислотонерастворимый продукт за 30 мин при 74 °С. Условия реакции: 50 мМ Трис-HCl, pH 9.0 (при 25 °С), 50 мМ NaCl, 10 мМ MgCl₂, 200 мM dATP, 200 мM dCTP, 200 мM dGTP, 50 мM [³H] dTTP, 0,25 мг/мл активированной ДНК из тимуса теленка.

Буфер для хранения HS-Taq ДНК-полимеразы:
50 мМ Трис-HCl, pH 8.0 (при 25 °С), 50 мМ NaCl, 0.1 мМ ЭДТА, 1мМ дитиотреитол, 50% (v/v) глицерин и 1% (v/v) Тритон Х-100.

5× ПЦР буфер (+MgCl₂):
50 мM Трис-НCl, рН 8.5 (при 25 °С), 250 мM KCl, 10 мМ MgCl₂, 0.5% (v/v) Tween 20, стабилизаторы Taq ДНК-полимеразы.

Область применения:
ПЦР с “горячим” стартом.
Высокопроизводительная ПЦР.
Обычная ПЦР с высокой воспроизводимостью.
Наработка ПЦР-продуктов для ТА клонирования.
Вторая стадия ОТ-ПЦР.

Ограничения к использованию:

• Не рекомендуется использовать для ампликонов длиной свыше 5 тыс. п.н.
  

Ингибирование и инактивация
Ингибиторы: ионные детергенты (дезоксихолат натрия, саркозил и додецилсульфат натрия (SDS) в концентрациях выше, чем 0,06, 0,02 и 0,01%, соответственно).
Инактивируется экстракцией смесью фенол/хлороформ.

Хранение и транспортировка: при -20 °С; не более 50 циклов замораживания-размораживания.

Срок хранения: при соблюдении условий хранения и транспортировки 1 год.

Супер-микс HiScript II Q RT SuperMix for qPCR специально разработан для 2-шаговой ОТ-кПЦР, содержит все компоненты, необходимые для проведения реакции обратной транскрипции, обратную транскриптазу HiScript II, ингибитор РНКаз, смесь dNTPs, смесь Random- и олиго(dT)20VN праймеров, а также реактив для удаления геномной ДНК gDNA wiper Mix.

Обратная транскриптаза HiScript II — это поколение обратной транскриптазы вируса мышиного лейкоза Молони (обратная транскриптаза M-MLV (RNase H-)) с повышенной термостабильностью и эффективностью синтеза кДНК.

Преимущества супер-микса HiScript II Q RT SuperMix for qPCR:

• Простая постановка реакции;
• эффективное удаление следовых количеств геномной ДНК, оставшихся в образце РНК;
• оптимальная активность обратной транскриптазы HiScript II при 50-55 °С обеспечивает эффективную обратную транскрипцию образцов со сложной вторичной структурой;
• обратная транскриптаза HiScript II устойчива к большинству ингибиторов ОТ-ПЦР;
• амплификация фрагментов кДНК длиной до 20 тыс. п.н.;
• синтезированная кДНК может использоваться в качестве матрицы непосредственно для проведения ПЦР в реальном времени.

Компоненты	R223-01 100 реакций (20 мкл/реакция)
Супер-микс HiScript II Q RT SuperMix for qPCR (5x) *	400 мкл
Смесь gDNA wiper (4х)	400 мкл
Отрицательный контроль No RT Control**	40 мкл
H2O протестированная на отсутствие нуклеаз	2×2 мл

* Состав супер-микса HiScript II Q RT SuperMix for qPCR (5х): обратная транскриптаза HiScript II, ингибитор РНКаз, смесь dNTPs, смесь Random- и олиго(dT)20VN праймеров.

**Отрицательный контроль No RT Control не содержит обратную транскриптазу, используется для обнаружения наличия остаточной геномной ДНК в матрице РНК.

Область применения: ПЦР c “горячим” стартом в режиме реального времени с применением олигонуклеотидных зондов, обычная ПЦР, высоковоспроизводимая ПЦР,
генотипирование; для амплификаторов, обеспечивающих нормализацию сигнала по пассивному референсному красителю ROX: Thermo Life Technologies (ABI) 7500, 7500.

Супер-микс HiScript II Q RT SuperMix for qPCR специально разработан для 2-шаговой ОТ-кПЦР, содержит все компоненты, необходимые для проведения реакции обратной транскрипции, обратную транскриптазу HiScript II, ингибитор РНКаз, смесь dNTPs, смесь Random- и олиго(dT)₂₃VN праймеров. Для проведения обратной транскрипции необходимо добавить матричную РНК и H₂O. Объём матричной РНК может составлять до 80% от общего объёма, что очень подходит для реакции обратной транскрипции при низкой концентрации РНК.

Обратная транскриптаза HiScript II — это новое поколение обратной транскриптазы вируса мышиного лейкоза Молони (обратная транскриптаза M-MLV (RNase H-)) с повышенной термостабильностью и эффективностью синтеза кДНК.

Преимущества супер-микса HiScript II Q RT SuperMix for qPCR

• Простая постановка реакции;
• оптимальная активность обратной транскриптазы HiScript II при 50-55 °С; обеспечивает эффективную обратную транскрипцию образцов со сложной вторичной структурой;
• обратная транскриптаза HiScript II имеет устойчивость к большинству ингибиторов ОТ-ПЦР;
• амплификация фрагментов кДНК длиной до 20 тыс. п.н.;
• синтезированная кДНК совместимы для проведения ПЦР в реальном времени с SYBR или кПЦР на основе флуоресцентно-меченных зондов;
• соотношение Random- и олиго(dT)23VN праймеров оптимизировано для обеспечения синтеза кДНК в любой области матричной РНК и воспроизводимости результатов кПЦР.

Компоненты	R222-01 100 реакций (20 мкл/реакция)
Супер-микс HiScript II Q RT SuperMix for qPCR (5х)*	400 мкл
Отрицательный контроль No RT Control (5х)**	40 мкл
H2O протестированная на отсутствие нуклеаз	2×1 мл

* Состав супер-микса HiScript II Q RT SuperMix for qPCR (5х): обратная транскриптаза HiScript II, ингибитор РНКаз, смесь dNTPs, смесь Random- и олиго(dT)₂₃VN праймеров, буфер для проведения реакции.

**Отрицательный контроль No RT Control содержит те же компоненты как супер-микс HiScript II Q RT SuperMix for qPCR (5х), за исключением обратной транскриптазы.

Условия хранения: -20 °С.

Набор реактивов для ПЦР с Taq-полимеразой Hot Start расширенный содержит рекомбинантную HS-Taq ДНК-полимеразу, три реакционных буфера (10× ПЦР буфер, 5× Green буфер и 5× GC буфер), а также другие компоненты, необходимые для проведения ПЦР (за исключением матрицы ДНК и праймеров).

HS-Taq ДНК-полимераза представляет собой рекомбинантную Taq ДНК-полимеразу, инактивированную специфическими моноклональными антителами. HS-Taq ДНК-полимераза неактивна при температуре до +70 °С. Это позволяет избежать образования неспецифических продуктов и праймер-димеров при низкой температуре на стадии смешивания компонентов ПЦР-смеси. Активация осуществляется на первом цикле ПЦР путём инкубации в течение 5 мин при +95 °С. Рекомбинантная Taq ДНК-полимераза обладает 5´-3´ ДНК-зависимой полимеразной активностью и 5’-3’ экзонуклеазной активностью нативной Taq ДНК-полимеразы из Thermus aquaticus. Скорость продвижения Taq ДНК-полимеразы зависит от сложности ДНК-матрицы и составляет примерно 1 т.п.н./мин. Рекомбинантная HS-Taq ДНК-полимераза идеально подходит для стандартной ПЦР с матрицы до 5 т.п.н.; она обладает способностью присоединять адениновый остаток к 3’-концу синтезируемой цепи, поэтому продукты ПЦР могут использоваться для ТА-клонирования.

10× ПЦР буфер оптимизирован для проведения большинства видов ПЦР, в том числе для проведения ПЦР в режиме реального времени с интеркалирующими красителями или флуоресцентными зондами. Буфер химически стабилен, инертен и не меняет оптимальной температуры отжига праймеров или характеристики плавления матрицы.

5× Green буфер содержит маркерные красители (сине-зелёный и желтый) и добавки, увеличивающие плотность раствора, для удобного нанесения на гель. Предназначен для стандартной ПЦР с оценкой выхода продуктов по конечной точке (методом разделения продуктов в геле). Буфер химически стабилен, инертен и не меняет оптимальной температуры отжига праймеров или характеристики плавления матрицы.

5× GC буфер предназначен для амплификации участков ДНК, богатых GC и/или имеющих сложную пространственную структуру. Буфер химически стабилен, содержит вещества, меняющие температуру отжига праймеров и характеристики плавления матрицы.

В состав всех буферов входят добавки, повышающие время полужизни и процессивность Taq ДНК-полимеразы за счет повышения её стабильности во время ПЦР. Все буферы в условиях разбавления до 1× (однократного) содержат 1,5 мМ MgCl₂. Входящие в набор 50 мМ раствор MgCl₂ и 50× смесь dNTP позволяют легко оптимизировать реакционную смесь под конкретную систему "матрица-праймеры". 6× Буфер для нанесения на гель облегчает пробоподготовку для электрофореза ПЦР-продуктов и контроль над ходом электрофореза.

Состав набора

Компонент	Кат. #
	1959.0500	1959.2500
HS-Taq DNA-полимераза, 5 ед. акт./ мкл*	1 × 100 мкл	2 × 250 мкл
10× ПЦР буфер	1 × 1.5 мл	3 × 1.8 мл
5× Green буфер	2 × 1.5 мл	5 × 1.8 мл
5× GC буфер	2 × 1.5 мл	5 × 1.8 мл
50 мМ MgCl2	1 × 1 мл	2 × 1 мл
50× смесь dNTP (10 мМ каждого)	2 × 200 мкл	2 × 800 мкл
6× буфер для нанесения на гель	1 × 1 мл	1 × 1.8 мл

* За единицу активности принимали количество фермента, катализирующее включение 10 нмоль dNTP в кислотонерастворимый продукт за 30 мин при 74 °С. Условия реакции:50 мМ Трис-HCl, pH 9.0 (при 25 °С), 50 мМ NaCl, 10 мМ MgCl₂, 200 мM dATP, 200 мM dCTP, 200 мM dGTP, 50 мM [³H] dTTP, 0,25 мг/мл активированной ДНК из тимуса теленка.

Буфер для хранения HS-Taq ДНК-полимеразы:
50 мМ Трис-HCl, pH 8.0 (при 25 °С), 50 мМ NaCl, 0.1 мМ ЭДТА, 1мМ дитиотреитол, 50% (v/v) глицерин и 1% (v/v) Тритон Х-100.

10× ПЦР буфер:
100 мM Трис-HCl, рН 8.5 (при 25 °С), 500 мM KCl, 15 мM MgCl₂, 0.5% (v/v) Tween 20, стабилизаторы Taq ДНК-полимеразы.

5× Green буфер:
50 мM Трис-НCl, рН 8.5 (при 25 °С), 250 мM KCl, 7,5 мМ MgCl₂, 0.5% (v/v) Tween 20, стабилизаторы Taq ДНК-полимеразы, маркерные красители.

5× GC буфер:
100 мM Трис-НCl, рН 8.5 (при 25 °С), 250 мM KCl, 7.5 мМ MgCl₂, 0.5% (v/v) Tween 20, ДМСО, стабилизаторы Taq ДНК-полимеразы.

Область применения:

• ПЦР с “горячим” стартом.
• Высокопроизводительная ПЦР.
• Обычная ПЦР с высокой воспроизводимостью.
• Наработка ПЦР-продуктов для ТА клонирования.
• Вторая стадия ОТ-ПЦР.
• ПЦР GC-богатых и сложно-структурированных участков ДНК.

Ограничения к использованию

• Не рекомендуется использовать для ампликонов длиной свыше 5 тыс. п.н.
  

Ингибирование и инактивация
Ингибиторы: ионные детергенты (дезоксихолат натрия, саркозил и додецилсульфат натрия (SDS) в концентрациях выше, чем 0,06, 0,02 и 0,01%, соответственно).
Инактивируется экстракцией смесью фенол/хлороформ.

Хранение и транспортировка: при -20 °С; не более 50 циклов замораживания-размораживания.

Срок хранения: при соблюдении условий хранения и транспортировки 1 год.

Экстра-микс HS-Taq представляет собой 2-кратную реакционную смесь, содержащую все компоненты, необходимые для проведения ПЦР (исключая ДНК-матрицу и праймеры):

• высокопроцессивную рекомбинантную HS-Taq ДНК-полимеразу с «горячим» стартом,
• смесь дезоксинуклеозидтрифосфатов,
• ПЦР-буфер,
• Mg²⁺.

Экстра-микс оптимизирован для проведения эффективной и воспроизводимой ПЦР c "горячим стартом"; он химически стабилен, инертен и не меняет оптимальной температуры отжига праймеров или характеристик плавления матрицы. В его состав входят добавки, повышающие время полужизни и процессивность HS-Taq ДНК-полимеразы за счет повышения её стабильности во время ПЦР, и компоненты, увеличивающие плотность пробы для удобства работы с ней. Форма реагентов для проведения ПЦР в виде экстра-микса экономит время и снижает вероятность контаминации за счет малого числа шагов пипетирования.

Экстра-микс HS-Taq не содержит веществ, мешающих проведению оптического контроля за ходом реакции по изменению флюоресценции пробы.

HS-Taq ДНК-полимераза, входящая в состав экстра-микса, неактивна при температуре ниже +70^оС. Для её активации необходим прогрев реакционной смеси при +95°С в течение 5 мин. Рекомбинантная HS-Taq ДНК-полимераза обладает 5´-3´ ДНК-зависимой полимеразной активностью и 5’-3’ экзонуклеазной активностью нативной Taq ДНК-полимеразы из Thermus aquaticus. Скорость продвижения Taq ДНК-полимеразы зависит от сложности ДНК-матрицы и составляет примерно 1 т.п.н./мин. Рекомбинантная HS-Taq ДНК-полимераза идеально подходит для стандартной ПЦР с матрицы до 5 т.п.н.; она обладает способностью присоединять адениновый остаток к 3’-концу синтезируемой цепи, поэтому продукты ПЦР могут использоваться для ТА-клонирования.

Кроме экстра-микса, в состав набора также включены 50 мМ MgCl₂ и стерильная вода. Входящий в набор раствор MgCl₂ позволяет легко оптимизировать реакционную смесь под конкретную систему "матрица-праймеры".

Состав набора

Кат. №	Кол-во реакций по 50 мкл	HS-Taq (2х)	50 мМ MgCl2	Вода	6× буфер для нанесения на гель
1960.0200	200	4 х 1.25 мл	1 х 1 мл	4 х 1.25 мл	1 х 1 мл
1960.1020	1020	17 х 1.5 мл	2 х 1.8 мл		1 х 1.8 мл

Состав экстра-микса HS-Taq (2х):

• 100 мM Трис-НCl, рН 8.5 (при 25 °С);
• 100 мM KCl;
• 0,4 мМ каждого дезоксинуклеозидтрифосфата;
• 4 мМ MgCl_2;
• 0,06 ед. акт./мкл HS-Taq ДНК-полимеразы;
• 0,2% Tween 20;
• стабилизаторы HS-Taq ДНК-полимеразы.

Преимущества использования экстра-микса с Taq-полимеразой с "горячим" стартом:

• Фермент с “горячим” стартом повышает специфичность, чувствительность и выход реакции.
• Для активации HS-Taq ДНК-полимеразы требуется не более 5 мин.
• Сокращается время на подготовку реакции.
• Снижается вероятность контаминации при смешивании компонентов ПЦР.
• Стандартизируются условия постановки однотипных реакций (снижается погрешность при смешивании компонентов ПЦР в разных экспериментах).
• Возможно использование в широком спектре видов ПЦР.
• Возможность ТА клонирования продуктов ПЦР за счет выступающих на концах амплифицированных фрагментов ДНК дезоксиаденозиновых остатков.

Область применения:

• ПЦР с "горячим" стартом.
• Высокопроизводительная ПЦР.
• Обычная ПЦР с высокой воспроизводимостью.
• Наработка ПЦР-продуктов для ТА-клонирования.
• Вторая стадия ОТ-ПЦР.

Ограничения к использованию:

• Не рекомендуется использовать для ампликонов длиной свыше 5 т.п.н.
  

Ингибирование и инактивация
Ингибиторы: ионные детергенты (дезоксихолат натрия, саркозил и додецилсульфат натрия (SDS) в концентрациях выше, чем 0,06, 0,02 и 0,01%, соответственно).
Инактивируется экстракцией смесью фенол/хлороформ.

Срок хранения и транспортировка: 1 год при -20 °С; не более 50 циклов замораживания- размораживания.

Экстра-микс RT-qPCR SYBR Blue предназначен для проведения обратной транскрипции и количественной ПЦР в режиме реального времени одношаговым методом с использованием флуоресцентного красителя SYBR Green I. Кроме собственно экстра-микса RT-qPCR, в состав набора входят 2-кратный буфер RT-qPCR SYBR Blue и вода, обработанная диэтилпирокарбонатом (ДЭПК). Буфер оптимизирован для протекания как обратной транскрипции, так и ПЦР (в том числе на сложных и GC-богатых матрицах) и содержит все необходимые компоненты (за исключением РНК-матрицы и праймеров), а также интеркалирующий краситель SYBR Green I. Хранение буфера при комнатной температуре в течение 2 дней не снижает эффективность реакции. Инертный краситель в составе Экстра-микса окрашивает его в голубой цвет (максимум поглощения – 615 нм) и облегчает контроль за раскапыванием смеси при использовании многолуночных планшетов.

Экстра-микс RT-qPCR представляет собой смесь обратной транскриптазы MMLV-RH и HS-Taq ДНК-полимеразы с "горячим" стартом в оптимальном соотношении для протекания обеих реакций.

MMLV–RH – генетически модифицированная обратная транскриптаза (ревертаза) вируса лейкемии мышей (M-MuLV). Она отличается от обратной транскриптазы MMLV дикого типа структурой, каталитическими свойствами и температурным оптимумом активности. Фермент проявляет РНК- и ДНК-зависимую полимеразную активность, но лишен активности РНКазы Н. MMLV–RH проявляет оптимальную активность при +42°С (активна до +50°С). Фермент способен синтезировать первую цепь кДНК длиной до 10 т.н. и включать модифицированные основания.

HS-Taq ДНК-полимераза представляет собой рекомбинантную Taq ДНК-полимеразу, инактивированную специфическими моноклональными антителами. HS-Taq ДНК-полимераза неактивна при температуре ниже +70^оС. Для её активации необходим прогрев реакционной смеси при +95°С в течение 5 мин. Рекомбинантная HS-Taq ДНК-полимераза обладает 5´-3´ ДНК-зависимой полимеразной активностью и 5’-3’ экзонуклеазной активностью нативной Taq ДНК-полимеразы из Thermus aquaticus. Скорость продвижения Taq ДНК-полимеразы зависит от сложности ДНК-матрицы и составляет примерно 1 т.п.н./мин. Рекомбинантная HS-Taq ДНК-полимераза идеально подходит для стандартной ПЦР с матрицы до 5 т.п.н.; обладает способностью присоединять аденин к 3’-концу синтезируемой цепи, поэтому продукты ПЦР могут использоваться для ТА-клонирования.

SYBR Green I - флуоресцентный интеркалирующий краситель для количественной и качественной детекции продуктов в ходе ПЦР в режиме реального времени. SYBR Green I обеспечивает простой и экономичный вариант для детекции и количественного определения ПЦР-продуктов без необходимости использования специфичных флуоресцентных зондов (в том числе в режиме реального времени). В ходе амплификации краситель SYBR Green I встраивается в малую бороздку ДНК ПЦР-продуктов и испускает более сильный по сравнению с несвязанным красителем флуоресцентный сигнал. Максимумы поглощения и испускания SYBR Green I - 494 нм и 521 нм соответственно, что позволяет использовать его со всеми известными на сегодняшний день амплификаторами для проведения ПЦР в режиме реального времени.

Состав набора

Кат. №	Кол-во реакций по 50 мкл	Экстра-микс RT-qPCR	Буфер RT-qPCR SYBR Blue(2x)	ДМСО	Вода, обработанная ДЭПК
1969.0040	40	80 мкл	2 х 0,5 мл	0,5 мл	2 х 0,5 мл
1969.0200	200	2 х 200 мкл	4 х 1,25 мл	0,5 мл	3 х 1,8 мл

Состав Экстра-микса RT-qPCR:

• 50 мM Трис-НCl, рН 8.0 (при +25 °С);
• 100 мM NaCl;
• MMLV-RH обратная транскриптаза;
• HS-Taq ДНК-полимераза;
• 1 мМ ЭДТА;
• 5 мМ дитиотреитол;
• 50% (v/v) глицерин;
• 0,1% (v/v) NP-40.

Состав буфера RT-qPCR SYBR Blue (2х):

• 100 мM Трис-НCl, рН 8.3 (при +25 °С);
• 150 мM КCl;
• 0,6 мМ каждого дезоксинуклеозидтрифосфата;
• 10 мМ MgCl₂;
• 8 мМ дитиотреитол;
• интеркалирующий краситель SYBR Green I;
• инертный краситель;
• стабилизаторы и усилители активности ферментов.

Преимущества использования экстра-микса:

• Высокая специфичность.
• Высокая чувствительность.
• Простота и удобство в использовании.
• Низкая ошибка пипетирования и вероятности кросс-контаминации.
• Стандартизация условий постановки однотипных реакций (снижается погрешность при смешивании компонентов ПЦР в разных экспериментах).
• Возможность ТА-клонирования ПЦР-продуктов.

Область применения:

• Одношаговая стандартная ОТ-ПЦР.
• Количественный анализ РНК, в том числе анализ экспрессии генов.

Ограничения к использованию:

• Не рекомендуется использовать для ампликонов длиной свыше 5 тыс. п.н.
• Не рекомендуется использовать для ПЦР с флуоресцентными зондами.

Срок хранения и транспортировка:
9 месяцев при -20 °С; не более 30 циклов замораживания- азмораживания экстра-микса RT-qPCR.

Экстра-микс HS-Taq Color представляет собой 2-кратную реакционную смесь, содержащую все компоненты, необходимые для проведения ПЦР (исключая ДНК-матрицу и праймеры):

• высокопроцессивную рекомбинантную HS-Taq ДНК-полимеразу с "горячим" стартом;
• смесь дезоксинуклеозидтрифосфатов;
• ПЦР-буфер;
• Mg^2+;
• красители.

Экстра-микс оптимизирован для проведения эффективной и воспроизводимой ПЦР c “горячим” стартом; он химически стабилен, инертен и не меняет оптимальной температуры отжига праймеров или характеристик плавления матрицы. В его состав входят добавки, повышающие время полужизни и процессивность HS-Taq ДНК-полимеразы за счет повышения её стабильности во время ПЦР.

Увеличивающие плотность пробы компоненты и красители позволяют наносить реакционную смесь сразу на гель после амплификации для удобства работы с ней.
Форма реагентов для проведения ПЦР в виде экстра-микса экономит время и снижает вероятность контаминации за счет малого числа шагов пипетирования.
HS-Taq ДНК-полимераза, входящая в состав экстра-микса, неактивна при температуре ниже +70^оС. Для её активации необходим прогрев реакционной смеси при +95 °С в течение 5 мин. Рекомбинантная HS-Taq ДНК-полимераза обладает 5´-3´ ДНК-зависимой полимеразной активностью и 5’-3’ экзонуклеазной активностью нативной Taq ДНК-полимеразы из Thermus aquaticus. Скорость продвижения Taq ДНК-полимеразы зависит от сложности ДНК-матрицы и составляет примерно 1 т.п.н./мин. Рекомбинантная HS-Taq ДНК-полимераза идеально подходит для стандартной ПЦР с матрицы до 5 т.п.н.; она обладает способностью присоединять адениновый остаток к 3’-концу синтезируемой цепи, поэтому продукты ПЦР могут использоваться для ТА-клонирования.

Кроме экстра-микса, в состав набора также включены 50 мМ MgCl₂ и стерильная вода. Входящий в набор раствор MgCl₂ позволяет легко оптимизировать реакционную смесь под конкретную систему "матрица-праймеры".

Состав набора

Кат. №	Кол-во реакций по 50 мкл	HS-Taq Color (2х)	50 мМ MgCl2	Вода
1961.0200	200	4 х 1.25 мл	1 х 1 мл	4 х 1.25 мл
1961.1020	1020	17 х 1.5 мл	2 х 1.8 мл

Состав экстра-микса HS-Taq Color (2х):

• 100 мM Трис-НCl, рН 8.5 (при 25 °С);
• 100 мM KCl;
• 0,4 мМ каждого дезоксинуклеозидтрифосфата;
• 4 мМ MgCl₂;
• 0,06 ед. акт./мкл HS-Taq ДНК-полимеразы;
• 0,2% Tween 20;
• стабилизаторы HS-Taq ДНК-полимеразы;
• красители.

Преимущества использования экстра-микса HS-Taq Color с Taq-полимеразой с "горячим" стартом:

• Фермент с “горячим” стартом повышает специфичность, чувствительность и выход реакции.
• Для активации HS-Taq ДНК-полимеразы требуется не более 5 мин.
• Сокращается время на подготовку реакции.
• Снижается вероятность контаминации при смешивании компонентов ПЦР.
• Стандартизируются условия постановки однотипных реакций (снижается погрешность при смешивании компонентов ПЦР в разных экспериментах).
• Возможно использование в широком спектре видов ПЦР.
• Возможность ТА клонирования продуктов ПЦР за счет выступающих на концах амплифицированных фрагментов ДНК дезоксиаденозиновых остатков.
• Удобство нанесения проб на гель после амплификации благодаря высокой плотности смеси и наличию красителя

Область применения:

• ПЦР с “горячим” стартом.
• Высокопроизводительная ПЦР.
• Обычная ПЦР с высокой воспроизводимостью.
• Наработка ПЦР-продуктов для ТА клонирования.
• ОТ-ПЦР.

Ограничения к использованию:

• Не рекомендуется использовать для ампликонов длиной свыше 5 т.п.о.
• Из-за содержания красителя не рекомендуется использовать для ПЦР в режиме реального времени и других приложений, требующих измерения оптической плотности или флуоресценции пробы. Для таких приложений рекомендуется использовать смеси HS-qPCR или HS-qPCR SYBR Blue.

Ингибирование и инактивация
Ингибиторы: ионные детергенты (дезоксихолат натрия, саркозил и додецилсульфат натрия (SDS) в концентрациях выше, чем 0,06, 0,02 и 0,01%, соответственно).
Инактивируется экстракцией смесью фенол/хлороформ.

Срок хранения и транспортировка:
1 год при -20 °С; не более 50 циклов замораживания-размораживания.

Экстра-микс RT-PCR Color предназначен для проведения обратной транскрипции и ПЦР одношаговым методом. Кроме собственно экстра-микса, в состав набора входят 2-кратный буфер RT-PCR Color, ДМСО и вода, обработанная диэтилпирокарбонатом (ДЭПК). Буфер оптимизирован для протекания как обратной транскрипции, так и ПЦР и содержит все необходимые компоненты (за исключением РНК-матрицы и праймеров). Хранение буфера при комнатной температуре в течение 2 дней не снижает эффективность реакции. Буфер содержит красители, не влияющие на работу ферментов, и компоненты, увеличивающие плотность пробы для удобства нанесения на гель.

Экстра-микс RT-PCR Color представляет собой смесь обратной транскриптазы MMLV-RH и HS-Taq ДНК-полимеразы с "горячим" стартом в оптимальном соотношении для протекания обеих реакций.

MMLV–RH – генетически модифицированная обратная транскриптаза (ревертаза) вируса лейкемии мышей (M-MuLV). Она отличается от обратной транскриптазы MMLV дикого типа структурой, каталитическими свойствами и температурным оптимумом активности. Фермент проявляет РНК- и ДНК-зависимую полимеразную активность, но лишен активности РНКазы Н. MMLV–RH проявляет оптимальную активность при +42°С (активна до +50°С). Фермент способен синтезировать первую цепь кДНК длиной до 10 т.н. и включать модифицированные основания.

HS-Taq ДНК-полимераза представляет собой рекомбинантную Taq ДНК-полимеразу, инактивированную специфическими моноклональными антителами. HS-Taq ДНК-полимераза неактивна при температуре ниже +70^оС. Для её активации необходим прогрев реакционной смеси при +95°С в течение 5 мин. Рекомбинантная HS-Taq ДНК-полимераза обладает 5´-3´ ДНК-зависимой полимеразной активностью и 5’-3’ экзонуклеазной активностью нативной Taq ДНК-полимеразы из Thermus aquaticus. Скорость продвижения Taq ДНК-полимеразы зависит от сложности ДНК-матрицы и составляет примерно 1 т.п.н./мин. Рекомбинантная HS-Taq ДНК-полимераза идеально подходит для стандартной ПЦР с матрицы до 5 т.п.н.; обладает способностью присоединять аденин к 3’-концу синтезируемой цепи, поэтому продукты ПЦР могут использоваться для ТА-клонирования.

Состав набора

Кат. №	Кол-во реакций по 50 мкл	Экстра-микс RT-PCR Color	Буфер RT-PCR Color (2x)	ДМСО	Вода, обработанная ДЭПК
1971.0040	40	80 мкл	2 х 0,5 мл	0,5 мл	2 х 0,5 мл
1971.0200	200	2 х 200 мкл	4 х 1,25 мл	0,5 мл	3 х 1,8 мл

Состав Экстра-микса RT-qPCR:

• 50 мM Трис-НCl, рН 8.0 (при +25 °С);
• 100 мM NaCl;
• MMLV-RH обратная транскриптаза;
• HS-Taq ДНК-полимераза;
• 1 мМ ЭДТА;
• 5 мМ дитиотреитол;
• 50% (v/v) глицерин;
• 0,1% (v/v) NP-40.

Состав буфера RT-qPCR (2х):

• 100 мM Трис-НCl, рН 8.3 (при +25 °С);
• 150 мM КCl;
• 0,6 мМ каждого дезоксинуклеозидтрифосфата;
• 6 мМ MgCl₂;
• 8 мМ дитиотреитол;
• стабилизаторы и усилители активности ферментов;
• маркерные красители.

Преимущества использования экстра-микса:

• Высокая специфичность.
• Высокая чувствительность.
• Простота и удобство в использовании.
• Низкая ошибка пипетирования и вероятности кросс-контаминации.
• Стандартизация условий постановки однотипных реакций (снижается погрешность при смешивании компонентов ПЦР в разных экспериментах).
• Возможность ТА-клонирования ПЦР-продуктов.
• Сокращается стадия пробоподготовки для анализа результатов ПЦР - благодаря утяжеляющим добавкам и красителям, не требуется буфер для нанесения пробы на гель.

Область применения:

• Одношаговая стандартная ОТ-ПЦР.
• Анализ экспрессии генов.

Не рекомендуется использовать для ампликонов длиной свыше 5 тыс. п.н.

Срок хранения и транспортировка:
9 месяцев при -20 °С; не более 30 циклов замораживания-размораживания экстра-микса RT-qPCR.

Готовая 2-кратная смесь для ПЦР в режиме реального времени. Включает в себя все необходимые компоненты, кроме матрицы и праймеров — оптимизированный буфер, Taq ДНК-полимеразу Dual-Lock, термолабильную урацил-ДНК-гликозилазу, дезоксинуклеотидтрифосфаты (включая смесь дТТФ/дУТФ), референсный пассивный краситель ROX и интеркалирующий краситель SYBR Green I для детекции ПЦР-продуктов. Количества мастер-микса достаточно для постановки 1000 реакций по 20 мкл.

• Двойной механизм «горячего» старта ДНК-полимеразы обеспечивает специфическую активность фермента и предотвращает синтез побочных продуктов до начала амплификации;
• в состав смеси входят урацил-ДНК-гликозилаза и дУТФ, что предотвращает риск контаминации ПЦР-продуктами других реакций;
• готовые ПЦР-смеси сохраняют стабильность до постановки ПЦР в течение 72 часов;
• мастер-микс может использоваться как для ПЦР в обычном режиме, так и для быстрой ПЦР.

Мастер-микс PowerUp SYBR Green совместим с амплификаторами с функцией Real-time следующих производителей:

• Thermo Fisher Scientific: StepOne, StepOne Plus, 7500 и 7500 Fast, ViiA 7, линейка QuantStudio;
• Bio-Rad: IQ 5, CFX96/384;
• Roche: LightCycler 480.

Условия хранения +2-8 ^°С.

Наборы для постановки ПЦР в реальном времени для ПЦР в реальном времени геномной, вирусной и комплиментарной ДНК, в том числе для анализа мРНК: QuantiTect - наборы для стандартной ПЦР на основе HotStarTaq рекомбинантной ДНК-полимеразы из Th. aquaticus (94 кДа), активирующейся в течение 15 мин при 95 °С); QuantiFast - наборы для высокоскоростной ПЦР на основе HotStarTaq Plus рекомбинантной ДНК-полимеразы, активирующейся в течение 5 мин при 95 °С).
Наборы содержат красители (опционально ROX, SYBRgreen), буферы, нуклеотиды и активные компоненты в формате мастер-микс (готовая валидированная смесь для проведения эффективной ПЦР в режиме реального времени с системами детекции SYBRgreen, TaqMan, FRET probes, Molecular Beacons); совместно с наборами QuantiTect возможно использование урацил-N-гликозилазы (для удаления ПЦР-продуктов, инактивируется при 95 °С в течение 15 мин).