Возможно, вы сменили регион при заполнении корзины.
Часть товаров из корзины будет перемещена в статус отложенных
и не сможет быть оформлена для заказа, если вы продолжите работу в данном регионе
Всё, что нужно, для проведения вертикального электрофореза!
25.10.2023
Вертикальныйэлектрофорез представляет собой метод разделения заряженных макромолекул в полиакриламидном геле (ПААГ) под действием электрического поля. По сей день метод остается одним из популярных в молекулярной биологии и широко применяется лабораториями различного профиля для определения и анализа (нуклеиновых кислот) НК и белков, а также их фрагментов.
Электрофорезв ПААГ базируется на разделении молекул в электрическом поле в условиях ограниченной диффузии. Для этого гель устанавливается вертикально между анодным и катодным буферными резервуарами. ПААГ является матрицей, которая позволяет разделить белки и НК по их размеру и заряду. С помощью гребенки создаются лунки, в которые наносятся образцы. Для визуализации движения фрагментов в образцы добавляют краситель для отслеживания с более высокой электрофоретической подвижностью.
Электрическое поле, создаваемое двумя электродами – анодом и катодом, проходя через гель, задает движение молекул белков и нуклеиновых кислот к аноду.
Схема проведения вертикального электрофореза в ПААГ
На подвижность макромолекул в геле влияют разные факторы, которые стоит учитывать при проведении анализа. Основными из них являются:
Заряд. При увеличении суммарного заряда возрастает подвижность молекул.
Размеры. Проходя через гель более крупные молекулы задерживаются в порах геля, меньшие – более подвижные, проходят дальше, поэтому в результате электрофореза меньшие молекулы буду располагаться дальше от места нанесения, чем большие.
Форма. На подвижность также влияет форма молекулы. При наличии одного и того же размера, но разной формы, молекулы будут иметь разную подвижность. Например, глобулярные и фибириллярные белки.
Размер пор ПААГ. Молекулярное сито полиакриламидного геля задает скорость движения молекул в зависимости от размера пор. Чем меньше поры, тем медленнее движутся в нем крупные молекулы в отличие от мелких. Нужная пористось геля задается его концентрацией, которая может варьировать от 2 до 50%.
По окончании проведения электрофореза для визуализации разделенных фрагментов гель извлекают из камеры и проводят окраску специальными красителями, основанными на флюорохромах или белковых красителях.
Для определения размеров фрагментов образцы сравнивают с маркером молекулярного веса, содержащим фрагменты известного размера. Результаты могут быть визуализированы с помощью гельдокументирующей системы, что обеспечивает быструю и точную визуализацию и оценку размера фрагментов.
Особенности белкового электрофореза
В зависимости от задачи анализа для разделения макромолекул белков и их фрагментов используются два вида вертикального электрофореза: нативный электрофорез в ПААГ и электрофорез в денатурирующих условиях.
Нативныйэлектрофорез нужен для разделения цельных белков, нативных, не денатурированных, например, когда требуется сохранить ферментативную или другую функциональную активность белков.
Если требуется разделить белки строго по молекулярной массе, используется ПААГ-электрофорез в денатурирующих условиях, достигаемых обработкой пробы додецилсульфата натрия (SDS), что лишает белки вторичной, третичной или четвертичной структуры. Белки, благодаря SDS, обладают значительным суммарным отрицательным зарядом, поэтому дальнейшее разделение в ПААГ идет исключительно по молекулярной массе. В качестве денатуранта можно также использовать мочевину.
Видео про анализ белков при помощи SDS-ПААГ от ФГБОУ ВО
«Вятский государственный университет»
Достоинства и применение
Электрофорез в полиакриламидном геле обладает следующими достоинствами:
Высокая разрешающая способность – позволяет разделить молекулы по их размеру и заряду, что позволяет определить даже незначительные различия между образцами.
Высокая чувствительность – позволяет обнаруживать белки и НК очень малых концентраций.
Широкое применение. Электрофорез в ПААГ применяется в многочисленных областях биологии и медицины, включая иммунологию, молекулярную биологию, биохимию и генетику, а также другие научные области.
Возможность модификации. Поры ПААГ регулируются простым и управляемым способом путем изменения концентрации акриламида, что актуально для разделения частиц с меньшей молекулярной массой.
Электрофорез в ПААГ является одним из основных методов анализа белков и нуклеиновых кислот.
Определение молекулярной массы исследуемого белка
Применение электрофореза в полиакриламидном геле
Определение количества и качества белков и нуклеиновых кислот;
идентификация белков и нуклеиновых кислот (например, определение фальсификации белкового состава);
очистка и оценка чистоты белков (например, на различных стадиях хроматографического разделения);
сбор данных о регуляции экспрессии белков, определение размера, изоэлектрической точки и ферментативной активности;
анализ ДНК, включая секвенирование и определение мутаций;
изучение реакций поперечной сшивки ДНК.
Оборудование и принадлежности для вертикального электрофореза
Для проведения вертикального электрофореза нуклеиновых кислот и белков необходимо использовать реактивы и оборудование, которые удовлетворят потребности и требования лабораторных исследований. Мы предлагает широкий выбор проверенных реактивов и оборудования для проведения вертикального электрофореза таких производителей, как: diaGene (Диаэм, Россия), WSHT (Китай), Servicebio (Китай), neoFroxx (Германия), CDH (Индия), Vazyme (Китай). На ваш выбор представлены как готовые наборы, так и отдельные реактивы для вертикального электрофореза.
Оборудование для электрофореза включает источник питания и электрофорезную вертикальную камеру. Источник питания нужен для генерации стабилизированного постоянного тока и контроля силы тока и напряжения на выходе.
Электрофорезную вертикальную камеру следует выбирать, исходя из следующих характеристик: количество гелей (от 1 до 12), размер геля (от 7 до 20 см), толщина геля (0,75;1,0; 1,5 мм), количество образцов на гель (от 1 до 120), объем буфера (от 200 до 6000 мл). Также следует учесть возможность проведения блоттинга в этой же камере.
Для формирования геля при заливке используются: стекла (одинаковые по ширине, но разные по длине), спейсеры (определяют толщину геля), гребенки с многообразием размеров зубцов для формирования лунок, зажимы.
Источник питания для электрофоретического разделения НК, белков. Может быть использован для блотинга.
Характеристики источника питания WIX-EP300, Китай
Выходное напряжение, В — 10-300;
выходной ток, мА — 1-400;
выходная мощность, Вт — 75;
выход на 4 э/ф камеры;
таймер от 1 мин до 99 ч 59 мин;
ЖК дисплей, клавиатура;
режимы работы — постоянное напряжение, постоянный ток, постоянная мощность, таймер;
память на 20 программ по 10 шагов каждая;
безопасность — защита от дуговых пробоев, автоматический контроль перегрузки по току, напряжения, короткого замыкания. Защита от протечек, функция паузы;
Источник питания для электрофоретического разделения НК, белков. Может быть использован для блотинга.
Характеристики источника питания WIX-EP600, Китай
Выходное напряжение, В — 10-600;
выходной ток, мА — 1-1200;
выходная мощность, Вт — 1-500;
выход на 4 э/ф камеры;
таймер от 1 мин до 99 ч 59 мин;
ЖК дисплей, клавиатура;
режимы работы — постоянное напряжение, постоянный ток, постоянная мощность, таймер;
память на 20 программ по 10 шагов каждая;
безопасность — защита от дуговых пробоев, автоматический контроль перегрузки по току, напряжения, короткого замыкания. Защита от протечек, функция паузы;
TAE и TBE являются наиболее распространенными буферами, используемыми при полиакриламидном гель-электрофорезе НК. TBE-буфер рекомендуется применять для разделения малых фрагментов НК с высоким разрешением, TAE-буфер – если планируется очистка ДНК из геля с последующим клонированием или проведением других ферментативных реакций.
После проведения электрофореза для визуализации разделенных фрагментов гель извлекают из камеры и проводят окраску. Для белков, как правило, используется Кумасси 250 и Понсо S, для ДНК и РНК – бромистый этидий.
Выбор маркера молекулярного веса белков или нуклеиновых кислот зависит от поставленной задачи эксперимента. Неокрашенные стандарты подойдут, если нужно определить вес искомого белка и/или количество фракций в образце с дальнейшим окрашиванием геля. Если же планируется проводить после ПААГ вестерн-блоттинг, то подойдет любой окрашенный маркер с подходящим диапазоном масс, взаимодействующий со вторичными антителами, используемыми в эксперименте.
Акриламид и бис-акриламид
Товары будут загружены при просмотре раздела
Аммоний персульфат (ПСА)
Товары будут загружены при просмотре раздела
Буферы для нанесения образцов на гель
Товары будут загружены при просмотре раздела
Гели готовые для электрофореза белков
Товары будут загружены при просмотре раздела
Готовые буферные растворы
Товары будут загружены при просмотре раздела
ДНК/РНК-маркеры-концентраты
Концентраты необходимо смешать с красителем для нанесения на гель.
Товары будут загружены при просмотре раздела
ДНК-маркеры, готовые к применению
Смешаны с красителем для нанесения на гель.
Товары будут загружены при просмотре раздела
Красители интеркалирующие для визуализации нуклеиновых кислот
Товары будут загружены при просмотре раздела
Красители для визуализации белков
Товары будут загружены при просмотре раздела
Маркеры молекулярного веса белков
Товары будут загружены при просмотре раздела
Маркеры длин фрагментов ДНК и РНК
Товары будут загружены при просмотре раздела
Наборы реагентов для заливки гелей для электрофореза белков
Ниже вы можете задать вопрос или оставить запрос в свободной форме:
Файлы cookie
Ознакомьтесь с Политикой конфиденциальности, чтобы узнать больше о том, что такое cookies, а так же как и зачем мы используем их. Закрывая данное окно, вы отказываетесь от всех cookies.
Теперь с помощью мобильного телефона легко искать интересующее Вас оборудование,
реактивы и расходные материалы, проверять наличие на складе, сделать заказ
и отслеживать его выполнение!
Подпишитесь на канал Telegram Диаэм
Будьте в курсе последних новостей науки, технологий и интересных предложений!
Актуальные новости из мира Life sciences, биотехнологий и аналитической химии
стали еще доступнее.
Регистрация на сайте компании Диаэм доступна только для юридических лиц, для физических лиц сделать заказ и узнать его статус можно без регистрации или обратившись в компанию по телефону +7 495-745-0508 или электронной почте info@dia-m.ru
